Menu
Вашият надежден партньор за аналитично оборудване и консумативи
MenuЗлатният стандарт на всяка хроматографска техника е да се постигнат симетрични Гаусови пикове за всички аналити, напълно отделени един от друг. Постигането на това пиково съвършенство прави количественото определяне на аналитите лесно и дава увереност, че съседни пикове не си влияят един на друг.
Но получаването на остри като игла пикове не винаги е лесно. Много фактори могат да изкривят формата, като технология за опаковане на колона, скорост на потока, подвижна фаза, пробоподготовка, дизайн на HPLC инструмента, температурни колебания, обем на допълнителната колона и мъртъв обем.
Мъртвият обем по-специално е нещо, което трябва да разберете и да се научите как да заобикаляте, защото тези обеми варират в зависимост от марката и модела на производителя, което може да повлияе както на развитието на вашия метод, така и на процесите на прехвърляне на метод.
Какво е мъртъв обем?
Мъртвият обем по същество са зоните в една HPLC система, в които аналитите могат да бъдат уловени и да останат в тях, което да навреди на хроматографската ефективност на разделянето. Този обем идва от множеството компоненти и обхваща кухини, открити във фитинги/връзки, дизайн на колони и инструменти.
Защо мъртвият обем влошава вашия анализ?
Мъртвият обем е неразривно свързан с ефективността на разделяне, което оказва огромно влияние върху ширината и формата на пика. И вследствие на това промените във формата на пика могат да намалят разделителната способност и да променят времето на задържане.
Ето основните начини, по които мъртвият обем може да повлияе на вашия анализ:
Мъртвият обем може да разшири пиковете, да намали разделителната способност на пиковете и да намали разделянето между близко елуиращи се съединения. Тази промяна затруднява количественото определяне на аналитите и по този начин намалява доверието в набора от данни.
По-широките пикове могат да доведат до намалена чувствителност. Това е така, защото с разширяването на пиковете, височината на пика впоследствие спада, което прави по-трудно разграничаването на сигнала на аналита от базовата линия.
Много методологии имат строги ограничения по отношение на тези променливи и резултатите, които попадат извън тези ограничения, може да се стигне до неуспехи на теста за пригодност на системата (SST), и потенциално провал на партидата за анализ.
Промените в мъртвия обем между два HPLC инструмента могат да доведат до проблеми с възпроизводимостта на времето на задържане, възпрепятствайки усилията ви за лесно прехвърляне на методи от една система в друга.
Какво причинява мъртвия обем и как можете да отстраните проблема?
Тъй като мъртвият обем е присъщ на всяка HPLC система и компоненти, не можете да премахнете напълно източниците. Но има неща, които можете да направите, за да разрешите проблема.
Ако вашата колона е повредена/използвана неправилно, неподходяща за анализ или с лошо качество, могат да се образуват кухини в опаковъчните перли.
Уверете се, че използвате подходяща колона в рамките на зададените ограничения (подвижна фаза/скорост на потока/pH/температура). Но също така да се борави внимателно, да не се оставя да изсъхне, да се изпуска в потока и т.н., всичко това може да доведе до кухини в уплътнението на колоната.
Използването на неправилни или некачествени капиляри и фитинги създава допълнителен обем в системата, където вашите аналити могат да попаднат в капан.
Фитинги, които поддържат практически нулев мъртъв обем, като нашите универсални безинструментни фитинги Thermo Scientific Viper Fingertight Fittings, могат да помогнат за подобряване на ефективността на разделяне.
Лошо проектиран път на потока създава ненужен допълнителен обем (използване на капиляри с дълъг/широк отвор) или има неефективен дизайн на системата за впръскване, инструментът по своята същност ще има висок мъртъв обем.
